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Les trois sociétés AB SCIEX, Phenomenex et Peak Scientific avaient affrété un camion de démonstration embarquant leurs dernières solutions LC/MS/MS pour aller au devant de leurs clients. Les appareils, comme le 4500 …
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Comme suite à notre article du 11 juin dernier « HPLC: Rétention d’un composé au volume mort » et pour répondre à la suggestion de Mikaël, nous soumettons quelques éléments pour la détermination du volume mort.
La connaissance de la géométrie de la colonne et des caractéristiques physiques de la phase stationnaire ne suffisent pas pour évaluer correctement le volume occupé par la phase mobile.
En effet, en chromatographie liquide en phase inversée avec des phases silice gréffée n-alkyl, le volume mort (V0) de la colonne est théoriquement indéterminé en raison de l’adsorption du modificateur organique sur les chaînes n-alkyle et de l’eau sur les groupes silanols.
Avec des phases mobiles binaires (eau/méthanol ou eau/acétonitrile) les phénomènes sont trés complexes et peuvent entainer des variations trés importantes de V0 selon la nature et la composition de la phase mobile.
Un article trés intéressant sur l’organisation de la R&D des groupes pharmaceutiques publié par le Nouvel Economiste
Confrontés à une productivité en berne, les laboratoires pharmaceutiques taillent dans leurs effectifs de R&D. Et essaient de trouver la pierre philosophale qui leur permettra de poursuivre leurs recherches à moindre coût, et avec une efficacité accrue. Cette recette miracle pourrait s’appeler “open innovation”. Elle permet aux Big Pharmas de se concentrer sur la mise sur le marché, et de “déléguer” la recherche à une multitude d’acteurs : universités, PME, petits laboratoires. Avec comme idées directrices, synergie et coopération. Une révolution qui demande un management inédit du “pipeline” d’idées. ….
La caractérisation des protéines reste toujours difficile et ne peut être obtenue que par l’utilisation d’un faisceau de méthodes d’analyses. Ce point est encore plus critique pour les protéines issues des biotechnologie et destinées à être commercialisées. La focalisation isoélectrique capillaire (cIEF), qui est une méthode d’électrophorèse capillaire, peut contribuer efficacement à cette caractérisation. Elle apporte une information sur la répartition des charges.
En cIEF, la séparation se déroule en deux étapes: la focalisation et la migration.
La séparation électrophorétique se fait dans un capillaire inerte pour éviter l’adsorption de protéines et sans écoulement électro-osmotique (EOF).
Cette Technique de caractérisation permet d’obtenir un profil de PI et de détecter les modifications structurelles ayant un effet sur la répartition des charges.
Exemples de profils obtenus au laboratoire…
L’efficacité en chromatographique liquide a été spectaculairement améliorée par l’introduction des particules de diamètre inférieur à 2 micron utilisées en UHPLC et par le développement récent des particules à noyau dur superficiellement poreuses (core-shell).
Un article d’ E. Lesellier paru dans Journal of chromatography décrit l’association de ces dernières générations de colonnes avec la chromatographie à fluide supercritique qui
permet d’accroitre encore l’efficacité de sépartion.
En effet les phases mobiles constituées de fluides à l’état supercritique ont des viscosités très inférieures aux phases mobiles liquides utilisées HPLC ou UHPLC. Elle conduisent à une meilleure efficacité théorique avec des baisses significatives de la pression. Il est donc possible d’utiliser des débits unitaires beaucoup plus élevés ou des colonnes beaucoup plus longues.
Le comportement cinétique des colonnes à noyau dur a été étudié en fonction du débit, de la pression et de la température, sur l’analyse d’une série d’alkylbenzènes avec 10% de méthanol ou d’acétonitrile dans le CO2. Les résultats ont été comparés aux particules entièrement poreuses classiques.
Une efficacité supérieure a été obtenue avec les nouvelles particules à noyau dur ce qui montre leur grand intérêt pour la chromatographie en fluide supercritique.
Cependant, des comportements cinétiques étonnants, qui favorisent l’efficacité des composés les plus retenus, sont observés. Ces comportements semblent dépendre du temps de séjour des composés dans la colonne, c’est à dire du débit de la phase mobile, et pourraient être expliqués par un gradient de température radial dans la colonne.
Source : E. Lesellier . Efficiency in supercritical fluid chromatography with different superficially porous and fully porous particles ODS bonded phases. Journal of Chromatography A,1228 (2012) 89-98
