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HPLC: Rétention d’un composé au volume mort ?

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Un article du Journal of Chemistry  Volume 2013 (2013), Hindawi Ed.

RP-HPLC Method Development and Validation for Simultaneous Estimation of Three Drugs: Glimepiride, Pioglitazone, and Metformin and Its Pharmaceutical Dosage Forms 

attire une remarque sur la rétention du composé Metformine et interpelle sur les fondamentaux de l’HPLC.

En effet le temps de rétention du composé est présenté à 1,34 min. Ce temps doit être supérieur au volume mort de la colonne pour témoigner de l’existence d’une rétention significative du composé.
La colonne utilisée est une Inertsil ODS-3 V – 250 mm × 4.6 mm, 5 μm porosité 100A. Le volume mort estimé à l’aide des caractéristique de la colonne pour un débit de 1,7 ml/min est de 1,55 min. Le temps de rétention du composé Metformine est donc inférieur au volume mort de la colonne: peut-on considérer dans ce cas que le composé répond à un mécanisme chromatographique ?

Les résultats de la validation de la méthode sur ce composé sont acceptables et ne permettent pas de détecter cette anomalie chromatographique. Ne faut-il pas dans ce cas introduire le détermination du facteur de capacite (K = (Tr-Tm)/Tm ) dans l’étude de la spécificité qui serait « négatif » pour ce composé et matérialiserait l’absence de rétention.

Colonne HILIC : « Un terme générique à décoder »

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Les molécules polaires sont difficiles à analyser en HPLC en raison de l’absence de rétention sur les colonnes classiques de phase inverse ou de leur faible solubilité dans les solvants d’élution utilisés en phase normale. La Chromatographie Liquide à Interaction Hydrophile (HILIC), qui utilise une phase stationnaire à greffage hydrophile, est devenue une approche alternative de plus en plus décrite pour séparer efficacement les espèces polaires.

La HILIC présente l’intérêt d’utiliser une phase mobile majoritairement organique contenant de l’eau comme éluant fort à une teneur pouvant aller de 5% au minimum à 30 ou 40 %. L’eau forme une couche polaire semi-immobilisée dans laquelle les analytes polaires vont interagir plus efficacement à la surface de la phase stationnaire.
Par conséquent le facteur de capcité de ces composés augmente fortement et la sensibilité est améliorée en détection par spectrométrie de masse du fait d’une désolvatation plus efficace des phases mobiles hautement organiques.
Un autre avantage dans l’utilisation de ces phases mobiles est une pression du système chromatographique plus faible, ce qui permet d’utiliser des débits plus élévés et d’accroître la rapidité de l’analyse.

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UPC2 : Un nouveau départ pour la Chromatographie en Fluide Supercritique

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La Chromatographie Convergente Ultra Performante (UPC2), primée à la Pittcon 2012, est une technologie Waters™ associant le potentiel la Chromatographie en Fluide Supercritique (SFC) à celui de la technologie UPLC®.
Nous avons assisté à un séminaire de présentation de ce nouvel appareil qui rend plus accessible la Chromatographie en Fluide Supercritique.
La simplicité de mise en oeuvre, la maitrise des paramètres physiques (pression, température, débit…) hérités de la technologie UPLC® rendent inutiles les outils de plomberie utilisés sur les appareils SFC précédents.

Waters™ positionne cette évolution technologique comme une nouvelle possibilité d’acceder à des solutions analytiques permettant de séparer des composés qui posent régulièrement des problèmes en LC et GC. (Composés hydrophobes, Isomères et composés chiraux, Lipides, Composés thermolabiles, Polymères…) et pour sa facilité de couplage avec la spectrométrie de masse en raison de son faible apport en solvants, de sa résolution élevée, de la finesse des pics et de la rapidité des séparations.

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SecurityGuard™: Quel rapport coût/efficacité pour la protection des colonnes UHPLC?

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Le risque d’obstruation des colonnes sub 2 µm UHPLC est plus important que celui des colonnes HPLC classiques avec des particules sub 3-5 µm. Cela est essentiellement lié au volume interstitiel plus petit des colonnes sub 2 µm, mais également à la porosité beaucoup plus faible du fritté de tête.

Dans une note technique, Phenomenex publie les résultats d’un test de protection par un dispositif SecurityGuard™. Le test porte sur le suivi de la contre pression d’une colonne Core-shell (2,6 µm Kinetex C18 50 x 4,6 mm) soumise à des séries d’injections d’une matrice biologique endogène (sans plus de précision…).

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Séminaire UHPLC du 27.03.2012 (Agilent Technologies)

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Mardi 27 Mars a eu lieu un séminaire d’Agilent Technologies sur l’UHPLC. Cette présentation était  l’occasion d’une revue détaillée des matériels de Chromatographie Liquide proposés par ce constructeur. J’ai relevé les points suivants :

– L’HPLC 1260 peut être utilisée jusqu’à une pression de 600 bars soit environ 150 bars de plus que le matériel HPLC classique. Elle empiète donc sur le domaine de UHPLC et permet surtout une utilisation étendue des colonnes Core-shell.
– L’UHPLC 1290 est dotée classiquement de deux pompes pour réaliser un mélange binaire haute pression.
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