A cette question basique chacun apporte une réponse plus ou moins subjective en fonction de son expérience, de sa pratique et de son équipement.
L’impact de la qualité et de la précision du mélange sur la reproductibilité des temps de rétention est bien connu mais les contraintes particulières de l’UHPLC (temps courts, faibles volumes…) redonnent de l’importance à ce critère.
Dans une note technique très simple, Agilent Technologies a le mérite de proposer une série d’expériences sur la précision des temps de rétention en fonction des conditions de préparation de la phase mobile : pré-mélange ou mélange dynamique.
Ces expériences s’appuient sur une analyse de glucocorticoïdes en UHPLC. La phase mobile utilisée est un mélange d’eau et d’acétonitrile (30/70).
Expérience 1 : 6 runs consécutifs avec mélange dynamique.
Expérience 2 : 6 runs consécutifs avec pré-mélange.
Expérience 3 : 10 runs avec mélange dynamique utilisé sur plusieurs jours.
Expérience 4 : 10 runs avec 6 pré-mélanges préparés par une seule personne.
Expérience 5 : 3 runs avec 3 pré-mélanges préparés par trois personnes différentes.
L’écart type relatif des temps de rétention a été évalué pour chaque séquence.
classiques avec des particules sub 3-5 µm. Cela est essentiellement lié au volume interstitiel plus petit des colonnes sub 2 µm, mais également à la porosité beaucoup plus faible du fritté de tête.