Analyse de Protéines natives sur colonne Core-shell

 

Thermo Fisher Scientific (AN 20506 – Joanna Freeke – Vleria Barattini) nous livre une note d’application sur l’utilisation d’une colonne core-shell, Accucore 150-C4-150Å, pour l’analyse d’un mélange de 6 protéines à l’état natif (sans digestion enzymatique).

 

Dans des conditions compatibles avec l’utilisation HPLC (185 bars) on obtient des pics symétriques, bien résolus. La dispersion des temps de rétention pour n=6 est également documentée. La capacité de pic, évaluée à 70 environ, reste  constante sur  l’étendue testée (de 30 à 1200 pmoles injectées). 

 

 

 

 

 

 

 

 

Alors qu’à cette granulométrie (2.6 µm) le standard du marché des Core-shell est plutôt à une porosité de 100Å, on peut citer la colonne Ascentis® Express Peptide ES-C18 HPLC (Supelco) qui présente une prorosité de 160Å.
Les colonnes Aeris® Wide Pore (Phenomenex) 200Å ou Poroschell®300 (Agilent) sont à 300Å mais pour des granulométries plus élevées (respectivement 3.6 et 5 µm).

On peut imaginer qu’un support 2-3µm avec une porosité de 300Å permettrait d’élargir les possibilités sur ce type d’applications.

Une réflexion au sujet de « Analyse de Protéines natives sur colonne Core-shell »

  1. Vous avez raison. Les phases Fused-core sont performantes sur les proteines car un peu comme les phases non poreuses, le transfert de matière est plus rapide donc il y a moins de dispersion. L’autre aspect, c’est qu’il est trés difficile de le calibrer la taille des pores sur ce type de phase. Lorsque les fabricants annoncent une porosite de 100A en fait la réalité est plutôt entre 50 et 200A.
    Les 2 phénomènes combinés offrent la possibilité de séparer des proteines jusqu’à 100KDa sur des phases 100A. Ce qui n’est pas possible sur des phases totalement poreuses.

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