Colonnes sub 2 µm: poreuse ou core-shell !

 

Comme nous l’avions vu dans un article précédent (Post du 4.06.12 ), Phenomenex est, à ce jour, le seul fournisseur à proposer des colonnes Core-shell  pour des granulométries inférieures à 2 µm.
Il est donc intéressant de voir si, dans ce domaine de taille, il subsiste une différence significative entre cette phase à noyau dur et les phases poreuses proposées par d’autres fournisseurs. 
Pour avancer sur cette comparaison, nous présentons ici les résultats d’un test des performances d’une colonne core-shell Sub 2 µm et d’une colonne poreuse Sub 2 µm pour l’analyse UHPLC d’un échantillon d’oligosaccharide thérapeutique (C95H143N11O59S8Na8 – Mw = 2823 g/mol).

La colonne core-shell utilisée est une Kinetex™ PFP 100 x 2.1 mm 1.7 µm (Phenomenex), et la colonne poreuse utilisée est une Acquity™ PFP 100 x 2.1 mm 1.8 µm (Waters) – Détection UV 244 nm – Gradient d‘élution Méthanol/Tampon de 10 min. Les conditions d’analyses sont identiques pour les deux colonnes.

Calculs des Grandeurs Chromatographiques : 

Dans les conditions du test, la colonne poreuse (Acquity) montre une bonne tenue à la charge avec un facteur de symmétrie de 1,00 et une sélectivité équivalente à celle de la colonne noyau dur. Cependant, la colonne core-shell (Kinetex) garde une avance significative sur le plan de l’efficacité et de la sensibilité. Cette différence d’efficacité peut s’expliquer par la taille de la molécule testée: le phénomène stérique pouvant jouer un role plus important avec des particules poreuses à plus grand volume intersticiel.

La robustesse des colonnes n’a pas été étudiée ici, l’évolution au cours du temps de la phase stationnaire et la reproductibilité inter-lots sont également des facteurs importants dans la comparaison des colonnes.

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