Le couplage de la chromatographie liquide à la spectrométrie de masse a connu une forte expansion ces dernières années grâce au développement de l’UHPLC. Elle est désormais couramment utilisée dans les développements de méthodes et même en contrôle de routine. Pour accompagner ce phénomène, après l’Acquity-QDa (détecteur quadripolaire de paillasse), Waters a décliné son concept sur la spectrométrie de masse à haute résolution avec le détecteur à temps de vol Acquity-RDa.
Ce détecteur de faible encombrement rend la spectrométrie de masse à haute résolution facilement accessible à toutes les étapes du cycle de vie d’une méthode pour les lesquelles la mesure de la masse unitaire (QDa) n’est pas suffisante.
Ce n’est pas seulement le cas lors de la création de la méthode mais également à l’étape de mise en production de la méthode pendant laquelle des déviations (apparitions ou augmentation de pics inconnus) peuvent bloquer le procédé de fabrication ou la libération de lots.
Figure 1 : Schéma du cycle de vie d’une méthode chromatographique
Etapes nécessitant une information sur la masse moléculaire exacte
Nous recherchions un instrument avec la capacité à répondre dans un court délai sans faire appel à une structure de laboratoire spécifique et complexe. Nous avons acquis un system UHPLC couplé à la spectrométrie haute résolution nommé ACQUITY Rda de chez Waters qui répond parfaitement à cet objectif. Ce détecteur est un spectromètre de masse à temps de vol.
L’utilisation au laboratoire de cet ensemble est équivalente à une chromatographie à détection UV, avec les restrictions d’usages liés à la spectrométrie de masse. Ce détecteur permet d’atteindre la masse exacte (10-5 unité) donnant accès avec précision à la fois au profil isotopique et au profil de fragmentation en paramétrant l’énergie de la source.
Figure 2 : Example de spectre de masse obtenu sur le détecteur Rda avec proposition de fragmentation
Le logiciel de traitement des données UNIFI spécifique à l’analyse des spectromètres de masse à haute résolution permet une analyse spectrale précise avec tous les outils nécessaires (étude de la fragmentation, proposition de formules brutes, de formules développées …).
L’automatisation (Smart MS) des réglages et de la calibration de ce détecteur rend ce système UHPLC/MS haute résolution accessible à tous moments, cette nouvelle plateforme ne nécessitant aucune installation particulière, est complémentaire aux plateformes de développement et répond aux exigences de l’aQbD.
Pour évaluer la performance de chaque colonne, nous avons retenu 4 critères : la moyenne des 6 facteurs de symétrie, la moyenne des largeurs à la base des 6 pics, la moyenne des 5 résolutions et la moyenne des 6 nombres de plateaux théoriques par unité de longueur. Nous avons ensuite utilisé une fonction de désirabilité (Derringer et Suich) pour trouver le meilleur compromis sur ces 4 paramètres.
